Los Papillomavirus Humanos (HPV) son virus epiteliotrópicos muy heterogéneos que infectan epitelios de sitios anatómicos diversos. Actualmente se han descripto más de 200 tipos distintos de HPV, el 25% de los cuales está asociado a infecciones de mucosas (HPV mucosotrópicos) y el 75% restante fue identificado en epitelios cutáneos (HPV cutaneotrópicos).
Los HPV mucosotrópicos comprenden más de 40 tipos y han sido clasificados en 2 grandes grupos :
• HPV de alto riesgo oncogénico (HPV-AR)
• HPV de bajo riesgo oncogénico (HPV-BR)
Los HPV-AR (tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 y 82) son agentes causantes de lesiones que pueden progresar a CCU (cáncer cérvico uterino) invasor. Su presencia en lesiones intraepiteliales aumenta el riesgo de progresión maligna, por lo que son considerados importantes agentes carcinogénicos. El HPV-16 está asociado a casi el 60% de los casos de CCU, el HPV-18 al 10-20% y el HPV-45 al 4% como HPV-31.
Los métodos de detección de ADN-HPV poseen muy alta sensibilidad clínica para la detección de lesiones H-SIL (66-95%) y por ello han sido recomendados para su utilización en el tamizaje primario de CCU y en el manejo de mujeres con citología indeterminada (ASC-US) o L-SIL.
El “WHO International Agency for Research on Cancer Working Group” ha re-definido el potencial oncogénico de los distintos tipos de HPV en distintos grupos:
• Grupo 1 (carcinogénicos) : HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59.
• Grupo 2A (probablemente carcinogénicos): HPV68
• Grupo 2B (posiblemente carcinogénicos): HPV26, 53, 66, 67, 70, 73, 82 / (sin evidencia) HPV30, 34, 69, 85, 97.
• Grupo 3 (bajo riesgo carcinogénico): incluye los HPV-BR.
HPV REAL-Detection V3.0 permite detectar 13 tipos de HPV-AR, excluyendo en el tipo HPV66 dado que la International Agency for Research on Cancer (IARC) lo reasignó al Grupo 2B, en 3 grupos de riesgo:
• HPV16/18/45
• HPV31/33/52/58
• HPV35/39/51/56/59/68
A nivel mundial, los tipos HPV16/18/45 son los más frecuentes en Cáncer Cervical Invasor. En una gran cantidad de estudios se ha demostrado que la presencia de HPV31/33/52/58 indica un riesgo muy superior de padecer lesiones CIN2+ prevalentes o incidentes a tres años en comparación a los tipos HPV35/39/51/56/59/68
FUNDAMENTO DEL HPV REAL-Detection V3.0:
Es un método de diagnóstico in vitro (IVD) para la detección cualitativa y simultánea del ADN viral de 13 tipos de HPV-AR (HPV-16/18/45; HPV-31/33/52/58; HPV-35/39/51/56/59/68) en pacientes con sospecha de infección y síntomas asociados a partir de muestras endocervicales. El procedimiento consiste en la purificación de ADN viral a partir de muestras clínicas, el cual luego se utiliza en la etapa de amplificación mediante qPCR en tiempo real (qPCR) utilizando cebadores específicos y sondas de hidrólisis (tipo TaqMan®). Estas sondas son oligonucleótidos conjugados con un fluoróforo en el extremo 5’ y una molécula extintora (quencher) en el extremo 3’ la cual por transferencia de energía de resonancia fluorescente inhibe la emisión del fluoróforo cuando se encuentra cercana. La mezcla de reacción contiene dUTP y la enzima UNG para evitar la contaminación residual (carry over). La reacción se lleva a cabo mediante la acción de una enzima Hot-Start Fast ADN polimerasa con actividad exonucleasa y tolerante a los inhibidores más comunes, que provoca la degradación de la sonda separándose el fluoróforo de la molécula extintora (quencher). El aumento de la señal de fluorescencia resultante por acumulación del ADN templado es detectado por el instrumento de qPCR en los canales:
• VIC/JOE/HEX para detección del Control Endógeno,
• FAM para detección de los HPV-16/18/45.
• Texas RED para la detección de los HPV-31/33/52/58
• Cy5 para la detección de los HPV-35/39/51/56/59/68
Además, se provee un Control Positivo, y agua libre de nucleasas para su uso como Control de Reactivos a fin de validar cada ensayo.
Para la interpretación de resultados para las muestras clínicas, HPV REAL-Detection V3.0 utiliza un valor de corte clínico (clinic cut-off) para lograr la máxima sensibilidad en detectar las neoplasias intraepitelial del cuello uterino (CIN) igual o superior a 2 (CIN2+) manteniendo al mismo tiempo un nivel de especificidad clínicamente aceptable en la población ASC-US.
Los HPV mucosotrópicos comprenden más de 40 tipos y han sido clasificados en 2 grandes grupos :
• HPV de alto riesgo oncogénico (HPV-AR)
• HPV de bajo riesgo oncogénico (HPV-BR)
Los HPV-AR (tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 y 82) son agentes causantes de lesiones que pueden progresar a CCU (cáncer cérvico uterino) invasor. Su presencia en lesiones intraepiteliales aumenta el riesgo de progresión maligna, por lo que son considerados importantes agentes carcinogénicos. El HPV-16 está asociado a casi el 60% de los casos de CCU, el HPV-18 al 10-20% y el HPV-45 al 4% como HPV-31.
Los métodos de detección de ADN-HPV poseen muy alta sensibilidad clínica para la detección de lesiones H-SIL (66-95%) y por ello han sido recomendados para su utilización en el tamizaje primario de CCU y en el manejo de mujeres con citología indeterminada (ASC-US) o L-SIL.
El “WHO International Agency for Research on Cancer Working Group” ha re-definido el potencial oncogénico de los distintos tipos de HPV en distintos grupos:
• Grupo 1 (carcinogénicos) : HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59.
• Grupo 2A (probablemente carcinogénicos): HPV68
• Grupo 2B (posiblemente carcinogénicos): HPV26, 53, 66, 67, 70, 73, 82 / (sin evidencia) HPV30, 34, 69, 85, 97.
• Grupo 3 (bajo riesgo carcinogénico): incluye los HPV-BR.
HPV REAL-Detection V3.0 permite detectar 13 tipos de HPV-AR, excluyendo en el tipo HPV66 dado que la International Agency for Research on Cancer (IARC) lo reasignó al Grupo 2B, en 3 grupos de riesgo:
• HPV16/18/45
• HPV31/33/52/58
• HPV35/39/51/56/59/68
A nivel mundial, los tipos HPV16/18/45 son los más frecuentes en Cáncer Cervical Invasor. En una gran cantidad de estudios se ha demostrado que la presencia de HPV31/33/52/58 indica un riesgo muy superior de padecer lesiones CIN2+ prevalentes o incidentes a tres años en comparación a los tipos HPV35/39/51/56/59/68
FUNDAMENTO DEL HPV REAL-Detection V3.0:
Es un método de diagnóstico in vitro (IVD) para la detección cualitativa y simultánea del ADN viral de 13 tipos de HPV-AR (HPV-16/18/45; HPV-31/33/52/58; HPV-35/39/51/56/59/68) en pacientes con sospecha de infección y síntomas asociados a partir de muestras endocervicales. El procedimiento consiste en la purificación de ADN viral a partir de muestras clínicas, el cual luego se utiliza en la etapa de amplificación mediante qPCR en tiempo real (qPCR) utilizando cebadores específicos y sondas de hidrólisis (tipo TaqMan®). Estas sondas son oligonucleótidos conjugados con un fluoróforo en el extremo 5’ y una molécula extintora (quencher) en el extremo 3’ la cual por transferencia de energía de resonancia fluorescente inhibe la emisión del fluoróforo cuando se encuentra cercana. La mezcla de reacción contiene dUTP y la enzima UNG para evitar la contaminación residual (carry over). La reacción se lleva a cabo mediante la acción de una enzima Hot-Start Fast ADN polimerasa con actividad exonucleasa y tolerante a los inhibidores más comunes, que provoca la degradación de la sonda separándose el fluoróforo de la molécula extintora (quencher). El aumento de la señal de fluorescencia resultante por acumulación del ADN templado es detectado por el instrumento de qPCR en los canales:
• VIC/JOE/HEX para detección del Control Endógeno,
• FAM para detección de los HPV-16/18/45.
• Texas RED para la detección de los HPV-31/33/52/58
• Cy5 para la detección de los HPV-35/39/51/56/59/68
Además, se provee un Control Positivo, y agua libre de nucleasas para su uso como Control de Reactivos a fin de validar cada ensayo.
Para la interpretación de resultados para las muestras clínicas, HPV REAL-Detection V3.0 utiliza un valor de corte clínico (clinic cut-off) para lograr la máxima sensibilidad en detectar las neoplasias intraepitelial del cuello uterino (CIN) igual o superior a 2 (CIN2+) manteniendo al mismo tiempo un nivel de especificidad clínicamente aceptable en la población ASC-US.
