MultiTarget® HFE v3 KIT

Método de diagnóstico in vitro para la detección y discriminación alélica  de 
las variantes C282Y (rs1800562), H63D (rs1799945) y S65C (rs1800730) asociadas a
Hemocromatosis Hereditaria tipo 1.
La Hemocromatosis Hereditaria (HH) es una enfermedad genética autosómica recesiva caracterizada por la presencia de un exceso de hierro en el organismo debido a una disminución en la capacidad de absorción del hierro. El exceso de este metal resulta tóxico para el organismo por permitir la generación de especies químicas con alto poder reactivo (radicales libres) que libres lesionan irreversiblemente aquellas moléculas con las que interaccionan. Este daño molecular termina por traducirse en daño tisular y orgánico. La HH incluye diferentes formas clínicas que responden a distintos tipos de alteraciones genéticas.
La HH tipo 1 (HH-1) es la más frecuente en la población y se asocia a la presencia de ciertas variantes en el gen HFE (OMIM #235200) situado en el cromosoma 6 (6p21.3). En estos pacientes tienen relevancia clínica principalmente las variantes:
c.845G>A [C282Y] (rs1800562):  sustitución de una tirosina por cisteína en la posición 282 de la proteína.
c.187C>G [H63D] (rs1799945):  sustitución de una histidina por ácido aspártico en la posición 63 de la proteína
c.193A>T [S65C] (rs1800730): sustitución de una serina por cisteína en la posición 65 de la proteína.

Los pacientes afectados de HH-1 presentan la variante C282Y en forma homocigota (90 – 95% de los pacientes) o las variantes C282Y/H63D (≈ 5% de los pacientes) o C282Y/S65C (≈ 3% pacientes) en forma de heterocigosis compuesta. Los pacientes homocigotos H63D/H63D o S65C/S65C no presentan un riesgo incrementado de sobrecarga férrica.
La prevalencia de los genotipos que predisponen a HH-1 es muy alta, siendo de 1/200 o 1/300 en población caucásica. A pesar de que la “penetrancia bioquímica” de la enfermedad es muy alta (más del 90% de los individuos homocigotos C282Y presentará valores anormalmente altos del índice de saturación de transferrina (IST) o ferritina), la “penetrancia clínica” de los genotipos mencionados es baja. En el caso de los homocigotos C282Y es aproximadamente del 10% valorada como presentación de cirrosis hepática a lo largo de los años. En el resto de los genotipos implicados la penetrancia clínica es menor del 1%
La susceptibilidad genética de la forma más frecuente de HH-1 (homocigosis C282Y del gen HFE) se observa en aproximadamente una de cada 250 personas caucásicas. La expresión fenotípica (presencia de enfermedad o alteración de parámetros bioquímicos) se produce en aproximadamente el 70% de los homocigotos C282Y, y menos del 10% de los homocigotos C282Y desarrollan una sobrecarga de hierro lo suficientemente intensa como para originar daño orgánico. Es imposible predecir si un homocigoto C282Y expresará la enfermedad fenotípica.

FUNDAMENTO DEL MultiTarget® HFE v3 KIT:
Se basa en la tecnología de Reacción en Cadena de la Polimerasa en tiempo real (qPCR) para la detección específica de los alelos con y sin las variantes C282Y, H63D y S65C del gen HFE en pacientes con sospecha de HH-1.
A partir de ADN genómico (ADNg) purificados de sangre entera anticoagulada con EDTA, se realiza la amplificación mediante qPCR utilizando cebadores específicos y sondas de hidrólisis (tipo TaqMan®). Estas sondas son oligonucleótidos conjugados con un fluoróforo en el extremo 5’ y una molécula extintora (quencher) en el extremo 3’ la cual por transferencia de energía de resonancia fluorescente inhibe la emisión del fluoróforo cuando se encuentra cercana. La mezcla de reacción contiene dUTP y la enzima UNG para evitar la contaminación residual (carry over). La reacción se lleva a cabo mediante la acción de una enzima Hot-Start Fast ADN polimerasa con actividad exonucleasa y tolerante a los inhibidores más comunes, que provoca la degradación de la sonda separándose el fluoróforo de la molécula extintora (quencher). El aumento de la señal de fluorescencia resultante por acumulación del ADN templado es detectado por el instrumento de qPCR en los canales:
• VIC/JOE/HEX para detección del alelo no mutado del C282Y, H63D o S65C,
• FAM para detección del alelo mutado del C282Y, H63D o S65C.
Además, se provee un control positivo para los alelos mutados y no mutados del gen HFE y agua libre de nucleasas para su uso como control de reactivos a fin de validar cada ensayo.
Presentaciones
• Kit para 25 determinaciones
• Kit para 50 determinaciones
• Kit para 100 determinaciones
DETECCIÓN DE PATÓGENOS
MultiTarget® NeuroV KIT I
Detección cualitativa de los virus  HSV-I, HSV-II y VZV
a partir de muestras de
líquido cefalorraquídeo.
MultiTarget® NeuroV KIT II
Detección cualitativa de los virus  CMV, EBV y EV
a partir de muestras de
líquido cefalorraquídeo.
MultiTarget® Dengue Sc & Type
Detección cualitativa de los distintos sero/genotipos del virus Dengue (DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4)a partir de muestras de suero o plasma.
MultiTarget® ITS Ferti KIT I
Detección cualitativa de Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae y Mycoplasma genitalium a partir de muestras de exudado endocervical, exudado uretral y orina.
MultiTarget® ITS Ferti KIT II
Detección cualitativa de Trichomonas vaginalis, Mycoplasma hominis y Ureaplasma spp a partir de muestras de exudado endocervical, exudado uretral y orina.
MultiTarget® TBC+Res KIT
Detección cualitativa del complejo Mycobacterium tuberculosis y de las principales variantes de resistencia a rifampicina e isoniazida a partir de muestras respiratorias.
DETECCIÓN DE VARIANTES GÉNICAS
MultiTarget® THR KIT
Detección cualitativa de los alelos normal y mutado para las variantes c.1691G>A del gen F5 (Factor V Leiden) y c.20210G>A del gen F2 (deficiencia de Protrombina) a partir de muestras de sangre entera.
MultiTarget® THR Plus KIT
Detección cualitativa de los alelos normal y mutado para la variante 4G/5G del gen SERPINE (PAI-1) y las variantes c.677C>T y c.1298A>C del gen MTHFR a partir de muestras de sangre entera.