Las infecciones respiratorias virales suelen afectar las vías superiores o inferiores, y aunque pueden clasificarse en función del virus causante, en general se distinguen clínicamente de acuerdo con el síndrome observado: resfriado común, gripe, bronquiolitis, laringotraqueobronquitis (crup) o neumonía. Si bien, cada virus suele producir manifestaciones clínicas características, pueden estar relacionados con los síndromes respiratorios de etiología viral.
La gravedad de la enfermedad respiratoria viral es muy variable, siendo grave con mayor frecuencia en pacientes de edad avanzada y lactantes.
El virus Respiratorio Sincicial (VRS) ocasiona síntomas leves, similares a los del resfriado, en los adultos y en los niños sanos mayores. Sin embargo, es la causa más común de hospitalización en niños menores de 1 año. Otros agentes viral de importancia de este grupo etario, son:
- Adenovirus (ADV) que si bien puede causar infecciones en personas de todas las edades, son más comunes en niños menores de 5 años, especialmente si están en guarderías o salas escolares.
- virus Parainfluenza 1, 2, 3 y 4 (PIV-1/2/3/4) que son la causa principal de la laringotraqueobronquitis (crup) y se asocian con mayor gravedad en los niños con enfermedad pulmonar crónica.
FUNDAMENTO DEL Neo RespiV REAL-Detection V2.0:
Es un método de diagnóstico in vitro (IVD) para la detección cualitativa y simultánea del ARN viral de VRS y PIV-1/2/3/4, y ADN viral del ADV en pacientes con sospecha de infección y síntomas asociados a partir de muestras respiratorias. El procedimiento consiste en la purificación de los ácidos nucleicos virales a partir de muestras clínicas, el cual luego se utiliza en la etapa de retrotranscripción seguida de la amplificación mediante qPCR en tiempo real (qPCR) utilizando cebadores específicos y sondas de hidrólisis (tipo TaqMan®). Estas sondas son oligonucleótidos conjugados con un fluoróforo en el extremo 5’ y una molécula extintora (quencher) en el extremo 3’ la cual por transferencia de energía de resonancia fluorescente inhibe la emisión del fluoróforo cuando se encuentra cercana. La mezcla de reacción contiene dUTP y la enzima UNG para evitar la contaminación residual (carry over). La reacción se lleva a cabo mediante la acción de una enzima Hot-Start Fast ADN polimerasa con actividad exonucleasa y tolerante a los inhibidores más comunes, que provoca la degradación de la sonda separándose el fluoróforo de la molécula extintora (quencher). El aumento de la señal de fluorescencia resultante por acumulación del ADN templado es detectado por el instrumento de qPCR en los canales:
• VIC/JOE/HEX para detección del Control Endógeno,
• FAM para detección de PIV-1/2/3/4.
• Texas RED para la detección de RSV.
• Cy5 para la detección de ADV.
Además, se provee un Control Positivo, y agua libre de nucleasas para su uso como Control de Reactivos a fin de validar cada ensayo.
La gravedad de la enfermedad respiratoria viral es muy variable, siendo grave con mayor frecuencia en pacientes de edad avanzada y lactantes.
El virus Respiratorio Sincicial (VRS) ocasiona síntomas leves, similares a los del resfriado, en los adultos y en los niños sanos mayores. Sin embargo, es la causa más común de hospitalización en niños menores de 1 año. Otros agentes viral de importancia de este grupo etario, son:
- Adenovirus (ADV) que si bien puede causar infecciones en personas de todas las edades, son más comunes en niños menores de 5 años, especialmente si están en guarderías o salas escolares.
- virus Parainfluenza 1, 2, 3 y 4 (PIV-1/2/3/4) que son la causa principal de la laringotraqueobronquitis (crup) y se asocian con mayor gravedad en los niños con enfermedad pulmonar crónica.
FUNDAMENTO DEL Neo RespiV REAL-Detection V2.0:
Es un método de diagnóstico in vitro (IVD) para la detección cualitativa y simultánea del ARN viral de VRS y PIV-1/2/3/4, y ADN viral del ADV en pacientes con sospecha de infección y síntomas asociados a partir de muestras respiratorias. El procedimiento consiste en la purificación de los ácidos nucleicos virales a partir de muestras clínicas, el cual luego se utiliza en la etapa de retrotranscripción seguida de la amplificación mediante qPCR en tiempo real (qPCR) utilizando cebadores específicos y sondas de hidrólisis (tipo TaqMan®). Estas sondas son oligonucleótidos conjugados con un fluoróforo en el extremo 5’ y una molécula extintora (quencher) en el extremo 3’ la cual por transferencia de energía de resonancia fluorescente inhibe la emisión del fluoróforo cuando se encuentra cercana. La mezcla de reacción contiene dUTP y la enzima UNG para evitar la contaminación residual (carry over). La reacción se lleva a cabo mediante la acción de una enzima Hot-Start Fast ADN polimerasa con actividad exonucleasa y tolerante a los inhibidores más comunes, que provoca la degradación de la sonda separándose el fluoróforo de la molécula extintora (quencher). El aumento de la señal de fluorescencia resultante por acumulación del ADN templado es detectado por el instrumento de qPCR en los canales:
• VIC/JOE/HEX para detección del Control Endógeno,
• FAM para detección de PIV-1/2/3/4.
• Texas RED para la detección de RSV.
• Cy5 para la detección de ADV.
Además, se provee un Control Positivo, y agua libre de nucleasas para su uso como Control de Reactivos a fin de validar cada ensayo.
